彩色馬蹄蓮的組織培養及工廠化生產

馬蹄蓮為天南星科馬蹄蓮屬多年生草本植物。地下具褐色肥大肉質根莖，地上莖高可達lm或更高。葉基生，葉片劍形或戟形，先端銳尖，長1 5?45cm，全緣，葉柄長，鮮綠色有光澤。花莖基生，高與葉相近，頂端著生一肉穗花序，包于佛焰苞內，怫焰苞喇叭狀，先端長尖，長可達15 25cm，下部呈短筒狀，上部展開，形似馬蹄。馬蹄蓮以其獨特的佛焰苞和優美挺拔的莖葉深受人們的喜愛。目前，許多彩色馬蹄蓮品種應用越來越廣泛。現在栽培品種有很多，如‘圣紅’佛焰苞深玫瑰紅色；‘黑魔’佛焰苞鮮黃色，基部有黑色斑蜘‘財富’佛焰苞橙紅色；‘粉信’佛焰苞粉橙色；‘基安蒂’佛焰苞紅葡萄酒色；‘黑眼’佛焰苞淡黃色，基部有明顯的大黑色斑蜘‘玫尼特’佛焰苞鮮黃色；‘颯莫斯’絳紅色佛焰苞外又具有彩色大苞片，成重苞花等。隨著品種的增多和需求的增加，傳統的繁殖方法已經滿足不了人們的需求。目前，馬蹄蓮的組織培養及規模化生產的技術體系已經應用于生產，對加速良種馬蹄蓮的推廣利用起到了較大的作用。本文將簡單介紹彩色馬蹄蓮組織培養工廠化生產技術。

成本核算

在進行工廠化生產之前有一個至關重要的問題就是成本核算。因為組織培養需要大量的人力、物力和財力，生產成本一般比常規方法高。一般可以用以下方法來降低成本：

1．充分發揮設備的生產潛力，提高組培苗的產量；

2．提高生根率到90％以上，移栽成活率在40％以上；

3．節約用電，降低能耗；

4．適當提高增殖系數和繼代系數；

5．抓住商機，開拓市場。

工廠化生產流程

組織培養的車間條件  馬蹄蓮組織培養的工廠化生產應具備如下車間：洗滌車間、培養基配制分裝車間、消毒間、儲備室、按種車間和培養車間。要進行周年生產還應具有溫室和大棚。通過這些車間的共同工作可實現組培苗的流水線生產。目前已經有經改造過的培養基分裝設備，可實現培養基的自動分裝，而且成本不高，不但可以節省人力，還可以節省財力。接種車間應配有緩沖間，要求有超凈工作臺，使用前要先開機10mirl，目的是用紫外線滅菌。培養車間要求可以控制光照時間和光照強度，最好既要有自然光照還要有補光設備。沒有特殊要求時用自然光可以節約電能降低成本。溫室和大棚是組培苗馴化和生長成商品的地方，由于馬蹄蓮生長適溫白天為15℃一24℃，夜間白花馬蹄蓮最低溫度為13℃，紅花和黃花品種最低溫度為16℃，冬季越冬溫度要大于5℃，因此要求溫室和大棚要有遮光設施以遮去夏季的強光。

溫室或大棚中進行滅菌  馬蹄蓮組織培養中污染率高一直是一個有待解決的難題，若要降低污染率，可將彩色馬蹄蓮的球莖用殺菌劑進行處理，殺菌劑可用溫室常用的多菌靈50％可濕性粉劑。不同稀釋倍數的多菌靈處理時間不一樣，一般用2000倍液處理，不超過8小時，成活率可達70%，具體方法是將外植體的塊莖浸泡在多菌靈中。此種方法操作簡單、時間短、副作用小。還有一種方法是將彩色馬蹄蓮的母球洗凈后，用蛭石進行無土栽培，根據季節條件在溫室或大棚內培養一個月后，切取0．5一l cIll的生長芽，用0．1％的NaCI()滅菌10mm即可用于接種。實驗證明經過預培養的彩色馬蹄蓮的球莖，在相同的滅菌時間下(其中以10min效果最好)污染率僅為20％，成活率可以達到750,‘以上。

培養基配制分裝車間進行培養基的配制分裝  馬蹄蓮的組織培養中可用塊莖作外植體．初代培養時．塊莖在培養基MS+6BA2．0mg。‘L一＼土土0．5mg，。L中產生的叢生芽及愈傷組織最多、速度最快。

MS培養基的配方可參考具體方法如下：

(1)母液A、B、C、D的配制，按表1稱取藥品，將其溶解在蒸餾水中，定容至500ml。

(2)母液E的配制：將Nm?EDTA完全溶解后加FeS()n?7H z0溶解或將Na2一EDTA和FeSC)4?7H20分別溶解再相互溶合，定容為500ml，在遮光的褐色瓶內，貯存在冷藏室內。

(3)母液F制成高濃度液備用，貯存在冷藏室內。

每種激素必須單獨配成母液，用時根據需要取用。另外，多數激素難溶于水，要先溶于可溶物質，然后才能加水定容。它們的配法如下：將IBA先溶于少量的95％的酒精中，再加水定容到一定濃度。

NAA可先溶于熱水或少量95％的酒精中，再加水定容到一定濃度。

    6一BA先溶于少量1mol／L的HCl中再加水定容。

配制好的母液瓶上應分別貼上標簽，注明母液名稱、配制倍數、日期及配lL培養基時應取的量。

在生產實踐中，由于工廠化生產需要大量的培養基，因此可以根據以上配制原則，根據需要按比例和一定的濃度配制出大量的培養基，然后可用培養基分裝裝置，分裝在試管或錐形瓶里。

消毒車間內對培養基進行消毒將封裝好的培養基放在專用的滅菌容器里，例如高壓鍋中進行滅菌，在操作時首先要檢查一下是否放了足量的水，以免造成空燒或干鍋現象，然后將培養基保持直立狀態，依次碼入鍋中，注意容器與容器不要靠得太近，這樣滅菌的效果更好。關閉鍋蓋加熱，使鍋內壓力上升到0．5kg／cm2，然后打開氣閥，排出冷空氣，關閉放氣閥，待上升到0．5kg／cm2時，再次開啟放氣閥一次，使冷空氣徹底放掉，關閉放氣閥，使壓力穩定在1．1kg／cm。，即溫度為121℃的條件下，維持15?20min。切斷熱源。自然下壓后，再開啟放氣閥。取出滅菌后的培養基放在干凈的柜中。

接種車間對彩色馬蹄蓮塊莖進行接種  切取彩色馬蹄蓮的塊莖，接種在已消毒的培養基上，操作時要注意

以下幾點：

(1)組織培養常用的接種工具和試劑有鑷子、剪刀、解剖刀、酒精燈、消毒劑、無菌水等。這些工具在使用前必須嚴格消毒。

(2)接種前，無菌室要用紫外燈或化學殺菌劑消毒，紫外燈照射要毛E30mirL以上。在進行室內消毒時要注意人身安全和過敏反應。

(3)接種工作在超凈工作臺上進行，接種前超凈工作臺應預先工作1 5min以上。操作人員應在緩沖室內換好經過消毒的衛生服，戴上口罩。接種時用酒精棉認真擦洗臺面和手指(尤其是指縫和指甲)，盛外植體的燒杯和培養皿也要用酒精消毒。

(4)經過高壓滅菌的接種工具先用75％的酒精棉擦洗，再用酒精燈火焰灼燒，然后使其自然冷卻。

(5)接種時培養瓶瓶口要在酒精燈火焰附近，并在接種前后灼燒瓶口。夾取外植體時用力要適當。用鑷子夾取外植體放入瓶內時，不要碰瓶口。外植體和手指切勿碰到瓶口。

(6)接種過程中要將用過的鑷子、解剖刀經常在酒精燈上灼燒滅菌；解剖臺也要經常用燃燒的酒精棉球擦拭滅菌。接種過程中盡量不要說話，以防止細菌夾帶在氣流中進入培養容器。接種后要在酒精燈上灼燒瓶口和封口紙，并迅速封口。操作要規范、準確、迅速。

接種后將材料送入培養車間進行培養，培養車間最重要的就是溫度因子和光照因子，因此不但要有控溫設備而且要有補光設備和自然光，這樣才能保證組培苗的質量。彩色馬蹄蓮要求培養車間的條件是溫度27℃±1℃，每天光照16小時，光照強度20001ux。當產生了大量的愈傷組織后就可以進行繼代培養和生根培養。

繼代培養  通過初級培養已產生愈傷組織，為使愈傷組織進一步增殖需進行增殖培養，需調整培養基中激素的含量，經大量的實踐證明，培養基：MS+6BA2．0mg／L+NAA0．：3rag／L是誘導愈傷組織分化出芽的最理想的培養基。經此培養基的培養，不定芽的增殖較多，芽垂直生長雖然較慢，但葉色濃綠、植株粗壯。

生根培養  當繼代生長培養基中分化的幼苗高約2?3cm時，將無根苗轉移到生根培養基中進行生根培養。生根培養基為MS+NAA0．5mg／L+IBA?Na0．3mg／L。經生根培養基的培養，幼苗生長旺盛、根短而粗、分布均勻，白色最長可達5cm，植株葉色濃綠。

繼代培養和生根培養時要更換培養基，因此要求培養基配制分裝車間協調好各培養基的生產。繼代培養和生根培養也要在接種車間內進行，并且繼代和生根的組培苗要放在培養車間進行培養，因此在這幾個車間里可進行分區管理。

利用溫室和大棚對彩色馬蹄蓮進行馴化和移植培養出來的組培苗要想走出培養室，能在外界正常地生長，還必須經過一個馴化階段，讓組培苗逐漸適應外界的環境。馴化的具體方法是在培養車間內打開培養瓶蓋，在室溫下煉苗l_2天，使之適應外界的變溫環境。經過煉苗處理后的試管苗即可進行移植。移植前要充分考慮馬蹄蓮生長習性。馬蹄蓮喜溫暖濕潤的環境，不耐寒，怕日光暴曬。生長適溫為：10月至翌年3月，需溫度13℃一19℃，3月至10月為19℃一25℃，根據組培的不同時期可以調整栽培方法。如果組培苗要在冬季或較冷的時候進行移植，則應利用溫室來實現周年生產，如果在夏季或較暖的時候則可利用大棚進行移植，這樣可以大大降低成本。溫室或大棚內的濕度要在80％一9 0％左右，光照約20001ux。

移植前還要對栽培基質進行滅菌。實踐證明，用蛭石作栽培基質有利于幼苗的生長，幼苗生根最為旺盛。可將幼苗按5cm×5cm株行距進行栽植。移栽一個月內，注意保水和遮蔭。一個月后，幼苗開始迅速生長，可適當增強光照，并輔助噴施葉面肥。幼苗移栽以春、夏季成活率高，且生長期長，休眠時已形成2 3cm小塊莖。休眠后挖出塊莖，放于陰涼通風處貯藏，翌年春季經500nlg／L赤霉素浸泡處理10rain，然后正常栽培，5 6月即有少部分塊莖開花；其他需再培養一年，長成直徑5?8cm的大塊莖。這樣，可以達到植株生長整齊、長勢快、產花多、質量好、花色純的效果，并能保持原有品種特性。

馴化時還要注意以下幾點：

(1)溫度控制：馴化初期溫度應接近培養室溫度，幾天后馴化溫度逐漸接近自然溫度；

(2)濕度控制：最初保持較高的相對濕度，然后逐漸降低空氣相對濕度，但由于彩色馬蹄蓮喜濕潤環境，濕度要保持在80%一90%左右；

(3)光照控制：彩色馬蹄蓮忌陽光直射，為保持水分平衡應采取必要的遮光措施；

(4)防止雜菌侵染及病害：由于彩色馬蹄蓮喜濕潤的環境，因此也有利于軟腐病等病害的發生。個別植株發病時，應及時拔除病株，并用2000倍液的福爾馬林對土壤消毒，噴灑波爾多液防止擴散。發生蚜蟲危害時可噴灑40~‘氧化樂果1 500?2000倍液防治，并注意改善通風條件。

經馴化后組培苗具有了一定的適應能力可以直接用于切花和盆花生產。

切花生產

彩色馬蹄蓮的生產周期為6個月，因此可以利用組培苗和溫室大棚來實現彩色馬蹄蓮的周年生產。

栽植每床可栽3 4行，以品字形裁種較好，有利于株問的通風。栽植密度習品種高矮、生長勢的旺盛程度及種球的大小而不同。以塑料大棚生產彩色馬蹄蓮，667m。約用種球3000球；露地栽等的不超過5000球。栽植深度取決于塊莖大小，3?9cm不等，種植塊莖時應將生長點朝上。彩色馬蹄蓮的溫室栽培、露地栽培的種植密度可參照表2。

栽培管理

(1)水：大白花栽培種(品種)喜充足水分，塊莖栽種后澆透水，以后生產地也要保持潮濕；溫室(大棚)栽培的，四周地面也應經常灑水，以提高環境的濕度，操作中要防止肥水灌入葉鞘中引起腐爛。而彩色馬蹄蓮則用水量不可過大，只在基質或基部干燥時才澆透水，如果栽培基質潮濕，澆水就應適度；澆水的原則是次多、量少，在初期生長階段，即在第一張葉片完全發育時，可用滴灌法，每周澆水控制在幾次；以后，僅用少量水保持植株不受干燥；澆水時間以上午為好。國外生產中多用滴灌補充水分。

(2)溫度：溫室栽培中，土壤溫度保持15℃～18℃(越穩定越好)；空氣最低溫度為15℃，溫室溫度低，延長植株生長發育的時間，可使莖的高度增加；視氣溫情況，控制好土壤溫度，不能超過20℃，否則易遭受歐文氏桿菌感染。當植株達到合適的高度，春、秋季溫室中夜間溫度可降到16℃，以減緩植株生長，可使橙、紅、粉色品種佛焰苞顏色增強。

(3)光照：馬蹄蓮喜中一高度光照，以2。70001ux為宜，在春、秋季節，適當提高光的強度對花的質量和產量都至關重要。在夏季可遮30％陽光，防止土壤溫度升高及植株變矮。低光會使花苞褪色；短光照會降低植株高度，反之長日照能增加植株的高度。

(4)營養：追肥可每月施用兩次200×10一a的低氮、高鉀的液肥；適量的施肥有利于降低歐文氏桿菌感染的危險。

(5)疏葉處理：生長開花旺盛期，葉片繁茂達到擁擠程度時，就應及時疏葉。將外部枯老的葉子自基部剪除，保持株間通風良好，促進新花莖不斷抽生，可提高產花量。

采花  白色馬蹄蓮當佛焰苞先端向下傾，色澤由綠轉白時，為采收適期；彩色馬蹄蓮在佛焰苞著色良好，第一天開始產生花粉時，為適宜采收期。采收應在每天最涼爽時進行，植株不能潮濕，但植株體內應含有充足的水分。為此，收花期應每3?4天澆水一次。采收方式是將莖直接從塊莖中拔出，若從基部剪斷，則會影響下一朵花的抽出。拔出后隨即放在盛有清水(內有含氯藥片)的桶中，并置于6℃一8℃貯藏室1小時后，再行扎束、處理銷售。

盆花生產

上盆  即將培養出來的幼苗栽植在花盆中。上盆時要在盆底放入碎瓦片等排水物，上面再填一層培養土，以待栽苗。栽植完畢后，充分澆水，放在遮蔭處緩苗數日。

換盆  隨著馬蹄蓮的生長，需要從小盆換到大盆。應按植株發育的大小逐漸換到大盆，如果一下換到較大的盆，會影響根系的生長和水分的調節。

倒盆及松盆土  經過一段時間的生長，馬蹄蓮的株幅逐漸增加，造成株問擁擠，這就需要加大盆間的距離，以改善通氣和透光條件，也可以使馬蹄蓮的生長均勻一致。如果在澆水后盆土出現板結的現象，就需要松盆土，使空氣流通，植株生長良好。同時可以除去土面的青苔和雜草。

施肥栽植前要施足基肥。基肥以充分腐熟的餅肥、豬廄肥為好。除栽植前施基肥外，從5月份每10一15天追施一次液肥。花期停止追肥和噴水。肥料可用腐熟的餅肥水，生長旺季可每隔10天左右增施一次氮鉀混合的稀薄液肥。施肥時切忌將肥水澆入葉鞘內，以免引起腐爛。

澆水  彩色馬蹄蓮喜歡濕潤環境，因土壤需保持較高的含水量，所以生長期需經常澆水，并且早、晚用水噴灑花盆周圍地面，以增加濕度，最好5?7天用海綿沾水揩抹葉面，以保持葉片新鮮清潔。

光照管理  幼苗時，在有散射光處養護，注意不要直接日曬，也不可全部蔽蔭。花期需要充足的光線，光線不足佛焰苞常變成黃綠色，降低觀賞價值。但在夏季要遮去強烈的直射光。

盆花的周年生產馬蹄蓮于12月份開始開花，2?4月為開花盛期，花期可延續到5月份。5月至7月，進入休眠期，應少澆水，可將盆移到室外，并盡量為其創造一個較為干燥的環境，使盆側放，免積雨水，以防腐爛。待葉片全部枯黃后，取出塊莖，置于通風陰涼處貯藏，待秋季栽植前將大小塊莖分級分別栽植，大球開花，小球養苗，如果不讓馬蹄蓮休眠，可干6月下旬將其放置到完全遮蔭且通風極好的地方養護。每天中午、下午都要向地面噴水2?3次，以降低溫度，在白天氣溫不超過30℃的情況下，馬蹄蓮仍可繼續開花。一般lO月份寒露前，將馬蹄蓮移入溫室，控制澆水，保持室溫不低于10℃。春節前便可以開花，每周用接近室溫的清水洗葉面一次，保持葉片清新鮮綠。如空氣干燥時，應用水向花盆四周噴霧增濕。冬季注意增加光照。為促進提早開花，可提前澆2次稀薄肥水。這樣就可利用溫室來進行馬蹄蓮盆花的周年生產。

馬蹄蓮的工廠化生產是一個很復雜的過程。這個過程包括很多環節，每一個環節都需要大量的人力、物力以及財力。因此在進行工廠化生產時，要充分考慮可能遇到的每一個問題。只有在組織培養時科學嚴謹，生產時高效高質，銷售時緊抓商機，才能充分發揮組織培養在規模生產上的優勢，才能取得更大的效益。