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半邊蓮組織培養和快速繁殖

日期：2008-12-25 來源：北方園藝作者：我要評論（）

摘要：半邊蓮生長繁茂，分枝多，葉密集，纖細雋關，是花壇、園林鑲邊、組合盆栽和彩壇栽植的完美選擇。近幾年，隨著半邊蓮應用價值的不斷發掘，對半邊蓮的培養和繁殖越發引起人們重視。試驗運用組織培養技術，以MS為基本培養基，通過比較附加不同種類和濃度的植物生長調節物質(2，4-D、NAA、6-BA)對半邊蓮莖段和葉片愈傷組織誘導和分化的影響，篩選出了適宜的培養基配方，獲得了生長良好的愈傷組織和完整的半邊蓮再生植株，建立了一個半邊蓮快速繁殖程序。結果表明，外植體在MS+0．5 mg／L 2，4-D上可誘導愈傷組織；在培養基MS+0．3 mg／L6-BA上可以誘導愈傷組織分化出腋芽；在培養基MS+0．7 mg／L NAA上可誘導無根系植株短期內產生大量根系，形成完整植株。移栽后成活率可達85％。

關鍵詞：半邊蓮；組織培養；愈傷組織

半邊蓮(Lobelia chinensis)又稱為細米草、瓜仁草、急解索，是桔梗科半邊蓮屬多年生草本花卉，因其植株低矮，分枝多，葉密集，纖細雋美，是花壇、園林鑲邊、組合盆栽和彩壇栽植的完美選擇。喜濕，稍耐蔭，也適用于較陰濕處作觀賞草坪。半邊蓮盛花期時，成千上萬的小花簇擁在枝頭，繁茂的花簇把整個植株包裹得嚴嚴實實，十分漂亮。

目前，對半邊蓮組織培養的研究僅見于王連平、劉強等對半邊蓮(Lobelia Chinensis Lour)離體莖段再生進行了研究。此外，日本學者Ishimara等(1992)對與半邊蓮同科的植物Lobelia inflata進行了組培發根的研究。隨著半邊蓮應用價值的逐漸發掘，人們越來越重視半邊蓮的繁殖以及栽培品種的不斷更新。目前國內花卉市場上只有半邊蓮的種子和播種穴盤苗供應，國外一些專利無性扦插繁殖的品種在國內很難見到，常規育種方法繁育半邊蓮已經不能滿足人們日益增長的需求。因而用植物組織培養技術研究半邊蓮的離體快速繁殖，品種更新和大規模工廠化生產，盡快滿足人們日益增長的需求就顯出其優越性了。

1材料與方法

1．1材料

試驗材料來源于東北林業大學花卉研究所溫室內種植的半邊蓮。

1．2試驗方法

先用自來水沖洗選取的植物材料，然后用洗衣粉水浸泡和沖洗15 min左右。再在超凈工作臺用0．1％升汞(HgCl2)消毒7 min。處理后用無菌水沖洗3～4次。經過表面滅菌的材料用無菌濾紙將水吸掉。再用解剖刀切取莖尖下的莖段及葉片，通常幾毫米大小，切去莖段兩端因消毒而壞死的切口，莖段保留長度為4～6 mm；將葉片邊緣剪切，然后，將材料用槍式鑷子接種到不同培養基上進行培養。培養溫度為(25±1)℃，光照時間為16 h，光照強度為2 000～3 500 lx。

2結果與分析

2．1愈傷組織的誘導

在以莖段為外植體時，莖段在培養8～12 d后，莖段兩端產生愈傷組織，翠綠色，少數為白色，直徑0．3～0．5 cm。培養10～15 d后，培養基中莖段兩端切口處少數愈傷組織白色，呈球體狀，直徑0．8～1．3 cm。以MS 2培養基的莖段愈傷組織最明顯、最大，尤其是2，4-D濃度為0．5 mg／L(表1)。此外，從表1可看出，隨著2，4-D濃度的增加，莖段的出愈率先增加，在2，4-D濃度為0．5 mg／L時達到最大，然后，隨著2，4-D濃度的增加而降低。愈傷組織的生長情況在2，4-D濃度為0．5 mg／L時最好。

在誘導葉片愈傷組織培養基中，培養7～12 d后，葉片變為淡灰色，水漬狀，無明顯愈傷組織產生。培養14～18 d后葉片周邊膨脹，有淋巴狀愈傷組織產生，顆粒狀，淺綠色，直徑0．1～0．4 cm。培養16～23 d后葉片愈傷組織呈顆粒狀，直徑0．5～1．0 cm。同樣，隨著2，4-D濃度的增加，葉片的出愈率先增加，在2，4-D)濃度為0．5 mg／L時葉片的出愈率達到最大(表2)，然后，隨著2，4-D濃度的增加而降低。

表1 不同濃度2，4-D對莖段愈傷組織誘導和生長的影響

2，4-D濃度/mg·L-1	接種莖段數/個	產生愈傷組織塊數/個	出愈率/％	愈傷組織顏色	生長狀況
0.1	48	34	70．83	翠綠色，無光澤，直徑0．3～0．7 cm	++
0.3	41	36	87．80	翠綠色，無光澤，少數白色，直徑0．5～O．9 cm	+++
0.5	45	41	91．10	翠綠色，無光澤，0．7～1 3 cm	++++
0.7	47	37	78．72	翠綠色，無光瘁，少數白色，直徑0．6～1．0 cm	++

注：生長一般++，生長較好+++，生長最好++++。下表同。

表2 不同濃度2，4-D對葉片愈傷組織誘導和生長的影響

2，4-D濃度/mg·L-1	接種莖片數/個	產生愈傷組織塊數/個	出愈率/％	愈傷組織顏色	生長狀況
0.1	45	34	75．55	翠綠色，無光澤，直徑0．5～O．7cm	++
0.3	43	35	81．39	翠綠色，無光澤，少數白色，直徑0．6～0．9 cm	+++
0.5	47	42	89．36	翠綠色，元光澤，直徑0．7～1．0cm	++++
0.7	46	37	80．43	翠綠色，無光澤，少數白色，直徑0．5～0．7cm	+++

2．2不定芽的形成

試驗愈傷組織再分化形成再生植株的方式為先產生芽，后在莖的基部長根。培養過程中發現，在MS 3培養基上的外植體愈傷組織分化最明顯。接種于培養基中的莖段愈傷組織在18～25 d后，開始產生不定芽，芽體長度為1．5～2．6 cm，分化率隨6-BA濃度的增加先增加后減少(表3)。此外，從表3中可看出莖段愈傷組織的分化以6-BA 0．3 mg／L培養基產生的不定芽最多，生長最快。每個莖段產生不定芽6～12個。

接種于MS 3培養基中的葉片愈傷組織27～32 d開始產生不定芽，與莖段產生的不定芽相似，葉片愈傷組織產生的不定芽也為白色，芽體長度為0．8～2．5 cm，分化率隨6-BA濃度的增加先增加后減少，每個葉片產生不定芽4～7個(表4)。同樣，葉片愈傷組織的分化以6-BA 0．3 mg／L培養基產生的不定芽最多，生長最快。

表3 不同 6-BA濃度對莖段不定芽體誘導和生長的影響(25 d)

6-BA濃度/mg·L-1	接種莖段數/個	芽體數量/個	分化率/％	芽體長度/cm	芽體長勢
0.1	46	39	84．78	1．5～2.0	+++
0.3	56	52	92．85	2．5～3.0	++++
0.5	43	37	86．05	1．7～2.4	+++
0.7	50	41	82．00	1．8～2.6	++

表4 不同 6-BA濃度對葉片不定芽體誘導和生長的影響(35 d)

6-BA濃度/mg·L-1	接種莖片數/個	芽體數量/個	分化率/％	芽體長度/cm	芽體長勢
0．1	51	42	82．35	0.8～1.4	+++
0．3	56	49	87．50	1.2～2.5	++++
0．5	47	38	80．85	1.5～2.1	+++
0．7	46	35	76．08	1.4～1.9	++

2．3不定芽生根誘導

接種莖段在MS 0和MS 1培養基上培養30～35 d后就可形成完整植株，高度5～10 cm。葉片在MS 0和 MS 1培養基上培養37～42 d后就可形成完整植株，高為4～7 cm。培養30～43 d后在MS2和MS3培養基接種的莖段形成元根系不完整植株，高度6～9 cm。培養40～48 d后在MS 2和MS 3培養基接種的葉片形成無根系不完整植株，高度5～8 cm。

培養基中無根系的不完整植株如不繼代到生根培養基中生根培養，將無法繼續生長。因此將MS 2和MS3中無根系的不完整植株繼代到MS 4中進行生根培養。在培養38～47 d后，莖段無根系不完整植株開始生根，根系細長，白色，并且隨著NAA濃度的增加，根系生長逐漸增多，根長逐漸增長，以NAA 0．7 mg／L根系生長最多、最長，長度為3～4．5 cm(表5)。

在培養46～57 d后，葉片的不完整植株開始生根，白色，纖細，長度為2～3．6 cm，并與接種莖段的不定芽生根狀況相似，接種葉片不定芽產生的根系隨著NAA濃度的增加逐漸增多，根長逐漸增長，以N從0．7 mg／L根系生長最多、最長，長度為2．5～4．0 cm(表6)。

表5 不同NAA濃度對接種莖段生根的影響(55 d)

NAA濃度/mg·L-1	欲生根莖段數/個	生根莖段數/上	生根率/％	生根長度/cm	生根長勢
0．1	94	75	79．78	2.6～3.2	++
0．3	97	79	81．44	3.0～3.8	++
0．5	88	80	90．90	3.2～4.0	+++
0．7	97	92	94．84	3.0～4.5	++++

表6 不同NAA濃度對接種葉片生根的影響(45 d)

NAA濃度/mg·L-1	欲生根莖片數/個	生根莖片數/上	生根率/％	生根長度/cm	生根長勢
0．1	96	78	81．25	2.5～3.0	++
0．3	99	83	83．83	2.7～3.5	++
0．5	94	85	90．92	3.2～3.7	+++
0．7	92	89	96．73	3.3～4.0	++++

2．4練苗馴化及移栽

半邊蓮試管苗是在無菌、有營養供給、適宜光照和溫度、近90％的相對濕度環境條件下生長的，因此，在生理、形態等方面都與自然條件生長的半邊蓮很大差異。所以必須通過練苗，使它們逐漸地適應外界環境，從而在生理、形態、組織上發生相應變化，使之更適于自然環境，這樣才能保證試管苗順利移栽成功。

試驗在半邊蓮試管苗根長為3～5 cm時，去掉三角瓶的透氣膜，光照強度減為1 000 lx左右，進行練苗。經過10 d練苗后，用自來水洗掉小苗根部殘余培養基洗凈，分別移栽到盛有腐殖土的花盆中，保證空氣濕度在80％以上，放置于蔭涼處3～5 d，移栽到苗圃中，成活率為85％。（王廣軍中共黑龍江省委黨校張彥妮東北林業大學園林學院）

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